實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產品詳細介紹:
產品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
急性髓性白血病細胞;KG-1a | 貼壁生長 | EY-X63456 |
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細胞名稱 急性髓性白血病細胞;KG-1a
形態特性: 骨髓瘤細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性:
培養條件: IMDM:Iscove'sModiefiedDulbecco'sMedium新生牛血清,20%
傳代方法: 2x10-5細胞/ml
傳代情況:
凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養法(-)
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。
④如果發現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
rpIFN-g (50 UG)細胞名稱: 小鼠胚胎成纖維細胞;PA317 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)胎牛血清,10%
rpIFN-a (100000 UN)細胞名稱: 小鼠結締組織L細胞株929克隆;L-929[L929] MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)馬血清,10%
rPhos TrkA Cell-Based ELISA (1 KT)細胞名稱: 小鼠B淋巴細胞;WEHI231 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優質胎牛血清,10%;0.05mMβ-巰基乙醇
rPhos TH Aff Pur PAb (100 UL)細胞名稱: 小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14;MC3T3-E1Subclone14 α-MEM:AlphaMinimumEssentialMedium(withNucleosides)優質胎牛血清,10%
rphHeparinase III, CF (10 UG)細胞名稱: 小鼠顱蓋成纖維細胞;OP9 α-MEM:AlphaMinimumEssentialMedium(withNucleosides)優質胎牛血清,20%
rphHeparinase II, CF細胞名稱: 小鼠胚胎干細胞;ES-D3(CRL-1934) 干細胞培養基
rpGM-CSF, CF (10 UG)細胞名稱: 小鼠腎上腺皮質細胞;Y1 優質胎牛血清,10%
rpGM-CSF (10 UG)細胞名稱: 小鼠胚胎成纖維細胞;C3H/10T1/2,Clone8 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優質胎牛血清,10%
rpEndoglin, CF (25 UG)細胞名稱: SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-1 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS
rPDGF-AA MAb (Cl 184805) (500 UG)細胞名稱: 牛胚氣管細胞;EBTr(NBL-4) MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)胎牛血清,10%
rPDGF-AA Biot Aff Pur PAb (50 UG)細胞名稱: 恒河猴腎細胞;LLC-MK2 RPMI1640(w/oHepes)優質胎牛血清,10%
rPDGF-AA Aff Pur PAb (100 UG)細胞名稱: 牛腎細胞;MDBK RPMI1640(w/oHepes)優質胎牛血清,10%
rpCD31 (PECAM-1), CF (50 UG)細胞名稱: EB病轉化的絨猴淋巴細胞;B95-8 RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清,10%
rPBEF Aff Pur PAb細胞名稱: 非洲綠猴腎細胞;VERO MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)胎牛血清,10%
rNXRN1b Biot Aff Pur PAb (50 UG)細胞名稱: 猴脈絡膜-視網膜(內皮)細胞;RF/6A RPMI1640(w/oHepes)優質胎牛血清,10%
rNXRN1b Aff Pur PAb (100 UG)細胞名稱: 非洲綠猴腎細胞;CV-1 RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清,10%
急性髓性白血病細胞;KG-1a人硫角質素(KS)ELISA試劑盒Lp-PL-A2ELISAKit產品規格:48T/96T。
人硫類肝素(HS)ELISA試劑盒Lp-PL-A2ELISAKit產品規格:48T/96T。
人硫皮膚素(DS)ELISA試劑盒LPSELISAKit產品規格:48T/96T。
人硫軟骨素(CS)ELISA試劑盒Lptn/LTNELISAKit產品規格:48T/96T。
人尿游離(UFC)ELISA試劑盒Lptn/LTNELISAKit產品規格:48T/96T。
人葡萄糖6磷異構酶(GPI)ELISA試劑盒Lptn/LTNELISAKit產品規格:48T/96T。
人前列環素(PGI)ELISA試劑盒Lp-αELISAKit產品規格:48T/96T。
人鞘磷脂(SM)ELISA試劑盒Lp-αELISAKit產品規格:48T/96T。