公司細(xì)胞廣泛用于國(guó)內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究,作為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長(zhǎng)特性 | 貨號(hào) |
小鼠腎小球系膜細(xì)胞;SV40MES13 | 貼壁生長(zhǎng) | EY-X63907 |
細(xì)胞名稱 小鼠腎小球系膜細(xì)胞;SV40MES13
形態(tài)特性: 心肌成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)
特征特性: 這株細(xì)胞的細(xì)胞骨架染色突出呈現(xiàn)肌動(dòng)蛋白,在細(xì)胞質(zhì)中有豐富的平行微絲。有報(bào)道稱在1uM血管緊張素II存在下,它們會(huì)收縮。細(xì)胞在軟瓊脂中形成,SV40大T抗原陽(yáng)性。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清,5%;14mMHEPES
傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況: P(27+5)
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè): 陰性
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冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
副流感病1,2,3型IgM抗體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人內(nèi)膜腺癌細(xì)胞;HEC-1-B-Cas9-585形態(tài)特性: 上皮樣familyParamyxoviridae 1,2,3 IgM antibody
寨卡病IgM抗體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人內(nèi)膜腺癌細(xì)胞;HEC-1-B-Cas9-586形態(tài)特性: 上皮樣Zika virus IgM antibody
磷肌醇磷脂酶檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人內(nèi)膜腺癌細(xì)胞;HEC-1-B-Cas9-587形態(tài)特性: 上皮樣PLCZ1
環(huán)氧化合物水解酶2檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人內(nèi)膜腺癌細(xì)胞;HEC-1-B-Cas9-588形態(tài)特性: 上皮樣Epoxide Hydrolase 2
肝結(jié)節(jié)有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽8檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人內(nèi)膜腺癌細(xì)胞;HEC-1-B-Cas9-589形態(tài)特性: 上皮樣Organic Anion-Transporting Polypeptide 8
ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白C3檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人內(nèi)膜腺癌細(xì)胞;HEC-1-B-Cas9-591形態(tài)特性: 上皮樣ATP Binding Cassette Transporter C3
Eya1蛋白檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人內(nèi)膜腺癌細(xì)胞;HEC-1-B-Cas9-592形態(tài)特性: 上皮樣Eya1
皰疹病-8型感染檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人腎透明細(xì)胞癌;Caki-1-Cas9-593形態(tài)特性: 上皮樣herpes virus-8
狀瘤病16型IgM抗體檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞;NCI-H1975-Cas9-594形態(tài)特性: 上皮樣papillomavirus 16 IgM antibody
轉(zhuǎn)化受體電位陽(yáng)離子通道亞家族M成員7檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人內(nèi)膜腺癌細(xì)胞;HEC-1-B-Cas9-590形態(tài)特性: 上皮樣Transient Receptor Potential Cation Channel Subfamily M, Member 7
融合蛋白檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞;NCI-H1975-Cas9-596形態(tài)特性: 上皮樣fusion protein
二氫生物蝶呤檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 甲磺耐藥的胃腸道間質(zhì)瘤細(xì)胞系;GIST-1114形態(tài)特性: 上皮樣dihydrobiopterin
泛素蛋白檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: Imatinib耐藥的胃腸道間質(zhì)瘤細(xì)胞系;GIST-1210形態(tài)特性: 上皮樣ubiquitin
CC趨化因子受體3檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞;NCI-H1975-Cas9-595形態(tài)特性: 上皮樣CC-chemokine receptor 3
α-糖苷酶檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 抗LMP2A雜交瘤細(xì)胞株;5C12C4A6形態(tài)特性: 淋巴母細(xì)胞樣α-Glycosidase
皰疹病-1型感染檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 人抗CD19嵌合抗原受體T細(xì)胞株;CAR19-T-PL形態(tài)特性: 上皮樣herpes virus-1
蘋果脫氫酶2檢測(cè)試劑盒細(xì)胞名稱: 鞍帶石斑魚皮膚組織細(xì)胞系;GGSK形態(tài)特性: 上皮樣Malate Dehydrogenase2
小鼠腎小球系膜細(xì)胞;SV40MES13N-甲基野靛486-86-2中文別名:N-甲基金雀花
英文名:N-Methylcytisine
CAS登錄號(hào):486-86-2
分子式:C13H18N2O
分子量:218.14
分子結(jié)構(gòu):
外觀:無(wú)色針晶
規(guī)格:20mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測(cè)定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。
提取來(lái)源:豆科植物苦參Sophora flavescens Ait的干燥根。
藥理藥效:作用與金雀花相似而較弱。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái),吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。