實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產品詳細介紹:
產品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
小鼠胚胎細胞;BABL/C-E | 貼壁生長 | EY-X63747 |
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細胞名稱 小鼠胚胎細胞;BABL/C-E
形態特性: 成纖維細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞系來源于一13-14天的小鼠胚胎組織。2000年由中國科學院昆明細胞庫建立。
培養條件: M-199:withEarle'sBalancedSaltsSolution(EBSS)15%NBS
傳代方法: 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況: P3
凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 熒光法(-)
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。
④如果發現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
Epimedonin L
CAS No.:2215102-38-6
中文名:
分子式:C30H34O5
7基喜樹;7Ethylcampt 訂購|咨詢 緩激肽受體B2(BDKRB2) 規格: 20mg
柚皮素7O葡萄糖醛苷;Narin 訂購|咨詢 攝食抑制因子1(NES1) 規格: 10mg
野鷲尾苷;Lridin 訂購|咨詢 攝食抑制因子1(NES1) 規格: 20mg
鳶尾苷元磺;tectorigenin 訂購|咨詢 賴酰氧酶(LOX) 規格: 20mg
細辛醛;2,4,5Trimethoxy 訂購|咨詢 賴酰氧酶(LOX) 規格: 20mg
香蒲新苷;typhaneoside 訂購|咨詢 賴酰氧酶樣蛋白1(LOXL1) 規格: 20mg
五味子;schisandrol B 訂購|咨詢 賴酰氧酶樣蛋白1(LOXL1) 規格: 20mg
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三尖杉;Cephalotaxlen 訂購|咨詢 賴酰氧酶樣蛋白2(LOXL2) 規格: 20mg
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茄;Solanesol 訂購|咨詢 賴特異性去基酶4A(KDM4A) 規格: 20mg
女貞苷;ligustroflavone 訂購|咨詢 二受體1(OXGR1) 規格: 20mg
絡塞定;Rosiridin 訂購|咨詢 二脫氫酶(OGDH) 規格: 10mg
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CARM1 蛋白精N甲基4抗體 現貨供應 0.1ml Agarose
BTN2A2 嗜乳脂蛋白亞家族2成員A2抗體 現貨供應 0.2ml PEG 400
AMPK alpha 1/PRKAA1 腺苷單活蛋白激酶α1抗體 現貨供應 0.1ml Cholestyramine resin
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TP53TG3 p53靶蛋白3抗體 現貨供應 0.2ml D(+)Trehalose, dihydrate
TP53TG5 p53靶蛋白5抗體 現貨供應 0.2ml Sodium chloride
TSPYL5 特異性Y蛋白樣5抗體 現貨供應 0.2ml Guanidine hydrochloride
UBTD1 泛素結構域蛋白1抗體 現貨供應 0.2ml Adonitol
仲高 進口、國產 英文名稱:Periodicacid 含量:AR,33%
仲鎢銨 進口、國產 英文名稱:APT 含量:CP,98%
重堅牢藍 進口、國產 英文名稱:FastblueRRsalt 含量:BR,98%
重酒石銨 進口、國產 英文名稱:Ammoniumbitartrate 含量:2.5N,1㎜
重酒石鉀 進口、國產 英文名稱:Potassiumhydrogentartrate 含量:高純,97.5%
重酒石 進口、國產 英文名稱:Sodiumbitartratemonohydrate 含量:高純,99%
重水 進口、國產 英文名稱:Deuteriumoxide 含量:AR,99.9%
重碳銨 進口、國產 英文名稱:Ammoniumbicarbonate 含量:GR,97%
重碳鉀 進口、國產 英文名稱:KLyte 含量:BR
重碳 進口、國產 英文名稱:Sodiumhydrogencarboante 含量:光譜級,99.8%
小鼠胚胎細胞;BABL/C-E綠膿菌素測定培養基(PDP)規格:250g用途:用于綠膿桿菌的綠膿菌素測定試驗(GB標準)
無菌采樣袋(12cm*18cm)(帶壓條)規格:100個/包用途:用于樣品的采樣(小號采樣袋)
HBI單增李斯特氏菌生化鑒定條(GB)規格:5條/盒用途:用于單增李斯特氏菌的生化鑒定組成:木糖發酵管、鼠李糖發酵管、SIM生化管、3%過氧化氫酶試劑、葡萄糖、麥芽糖發酵管、發酵管、七葉苷發酵管、MR-VP(2孔),共10種生化反應。(GB標準)
BIGGY瓊脂規格:250g用途:用于念珠菌的分離培養和計數
卻普曼瓊脂規格:250g用途:用于檢測金黃色葡萄球菌
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