實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產品詳細介紹:
產品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞;MuM-2B | 貼壁生長 | EY-X63383 |
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細胞名稱 侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞;MuM-2B
形態(tài)特性: 多角
生長特性: 貼壁生長
特征特性:
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)10%FBS;20mMHepes
傳代方法: 1:3傳代;2~3天1次。
傳代情況: P21
凍存條件: 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法(-)
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
猴皮膚;RM-S1拉丁屬名: Sanghuangporus baumii2-(二-叔丁基膦)-2'-(N,N-二甲基氨基)聯苯Human SAMD4B ELISA Kit
恒河猴腎;RM-3拉丁屬名: Aspergillus flavus Link2-(二叔丁基膦)聯苯Human SAMD9 ELISA Kit
恒河猴腎;RM-2用途: 與大豆共生固氮,培養(yǎng)基pH4.5生長2-(二叔丁基膦)聯苯Human MVP(Major vault protein) ELISA Kit
SV40轉化的非洲綠猴腎;COS-1拉丁屬名: Debaryomyces hansenii3-氨基聯苯Human S100A3 ELISA Kit
恒河猴肺;RM-L1拉丁屬名: Aspergillus asperescens3-氨基聯苯Human SAMD9L ELISA Kit
恒河猴腎;MMK2注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用2-溴二苯并噻吩Human SAMHD1 ELISA Kit
EB病轉化的絨猴淋巴;B95-8拉丁屬名: Pleurotus porrigens (Pers. : Fr.) Gill.2-溴二苯并噻吩Human SACM1L ELISA Kit
恒河猴腎;RM-1拉丁屬名: Kocuria sp.(S)-(+)-香芹酮Human S100A5 ELISA Kit
獼猴胚胎來源拉丁屬名: Aspergillus nidulans(S)-(+)-香芹酮Human S100A3 ELISA Kit
非洲綠猴胚胎腎;marc145拉丁屬名: Corynebacterium ammoniagenesRetapamulinHuman SAMHD1 ELISA Kit
魚源用途: 教學研究3,5-二甲基-1-苯Human NEFL(Neurofilament light polypeptide) ELISA Kit
興國鯉尾鰭;XGL拉丁屬名: Dyadobacter soli3,5-二甲基-1-苯Human SACM1L ELISA Kit
高背鯽魚尾鰭;GBJd拉丁屬名: Chaetomium globosumBenfotiamineHuman S100A5 ELISA Kit
鯽魚腦星形膠質系;CAA規(guī)格: 10ml4-(2-噻唑基偶氮)Human SAFB ELISA Kit
鯉魚尾鰭;YZ16拉丁屬名: Pseudomonas sp.4-(2-噻唑基偶
侵襲性脈絡膜黑色素瘤細胞;MuM-2B犬C肽(C-Peptide)ELISA試劑盒HSF1ELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
犬轉移生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒Hsp-20ELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
犬肝素輔因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA試劑盒hSP-20ELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
犬血栓調節(jié)蛋白(TM)ELISA試劑盒HSP-20ELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
犬促黃體生成激素(LH)ELISA試劑盒HSP-20ELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
犬β內啡肽(β-EP)ELISA試劑盒HSP-20ELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
犬雌二醇(E2)ELISA試劑盒HSP-20ELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。
犬促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒HSP-27ELISAKit產品規(guī)格:48T/96T。