實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養,而不適用于懸浮細胞培養,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養皿,但不宜過大,以避免培養液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細胞廣泛用于國內院校的細胞生物學研究,作為實驗項目研究。下列產品詳細介紹:
產品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
乳腺癌細胞;MDA-MB-468 | 貼壁生長 | EY-X63401 |
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細胞名稱 乳腺癌細胞;MDA-MB-468
形態特性: 上皮樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞是1977年由CailleauR等從一位患有轉移性乳腺癌的51歲黑人女性的胸腔積液中分離得到的。雖然供體組織的G6PD等位基因雜合,但此細胞株始終表現為G6PDA表型。P53基因273位密碼子存在G→A突變,從而導致Arg→His替代。每個細胞上存在1×106個EGF受體。
培養條件: L15:LeibovitzMedium10%FBS
傳代方法: 1:2~1:4傳代;每周換液2~3次。
傳代情況: C4
凍存條件: 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養法(-)
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。
④如果發現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
雜交瘤細胞株;4D5形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-PBOV1 Polyclonal Antibody
Human RBBP9 ELISA Kit
人肺腺癌耐藥株拉丁屬名: Rhizopus stolonifer2-氟-6-三氟甲基芐Human RBM10 ELISA Kit
人黑色素瘤耐株拉丁屬名: Nocardia flavorosea2-氟-6-三氟甲基芐Human RBM14 ELISA Kit
低轉移人肝癌拉丁屬名: Flavobacterium frigidimaris2-氟-6-(三氟甲基)溴芐Human RASGRF1 ELISA Kit
人骨髓瘤注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用2-氟-6-(三氟甲基)溴芐Human RASGEF1B ELISA Kit
人B淋巴瘤拉丁屬名: Bensingtonia yamatoana乙二四乙酸二酐Human RBM11 ELISA Kit
人鼻中隔鱗狀癌拉丁屬名: Neurospora crassa乙二四乙酸二酐Human RASIP1 ELISA Kit
人多發性骨髓瘤拉丁屬名: Yarrowia lipolytica二亞乙基三五乙酸二酐(DTPA)Human RASSF4 ELISA Kit
人淋巴母注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用1,2-雙(二甲基瞵)乙烷Human RBM15 ELISA Kit
人腦星形膠質母瘤拉丁屬名: Salinisphaera sp.1,2-雙(二甲基瞵)乙烷Human RBM15B ELISA Kit
人神經膠質瘤拉丁屬名: Bacillus subtilis2,4-二羥基嘧啶-5-羧酸Human RASSF6 ELISA Kit
人黑素瘤用途: 具有一定殺蟲活性。2,4-二羥基嘧啶-5-羧酸Human RASSF8 ELISA Kit
小鼠原B株拉丁屬名: Rhizobacter? dauci1,6-庚二炔Human RBM16 ELISA Kit
人肺腺癌紫杉耐藥性拉丁屬名: Aspergillus oryzae1,6-庚二炔Human RB1CC1 ELISA Kit
人癌-紅色標記拉丁屬名: saitamae1,6-庚二炔Human RASSF7 ELISA Kit
人鼻咽癌-熒光素酶標記注意事項: 僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的,不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用4-叔丁基苯硫酚Human RANBP6 ELISA Kit
人癌-綠色標記拉丁屬名: Sphingomonas asaccharolytica4-叔丁基苯硫酚Human RAP2B ELISA Kit
乳腺癌細胞;MDA-MB-468兔子脫氫表雄硫酯(DHEA-S)ELISA試劑盒Humanovariancancermarker-CA125ELISAKit產品規格:48T/96T。
兔子神經生長因子(NGF)ELISA試劑盒HumanPancreastatinELISAKit產品規格:48T/96T。
兔子神經特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒HumanPancreaticcarcinomamarkers-CA242ELISAKit產品規格:48T/96T。
兔子神經營養因子3(NT-3)ELISA試劑盒HumanparamyxovirusparotitisIgGELISAKit產品規格:48T/96T。
兔子神經營養因子4(NT-4)ELISA試劑盒HumanparamyxovirusparotitisIgMELISAKit產品規格:48T/96T。
兔子瘦素(LEP)ELISA試劑盒HumanPentosidineELISAKit產品規格:48T/96T。
兔子透明質(HA)ELISA試劑盒HumanPepsinELISAKit產品規格:48T/96T。
兔子細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA試劑盒HumanPepsinELISAKit產品規格:48T/96T。