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相關(guān)蛋白1(FGL1)檢測ELISA試劑盒檢測原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心法：抗相關(guān)蛋白1(FGL1)單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的纖維蛋白原相關(guān)蛋白1(FGL1)會(huì)與單抗結(jié)合，游離的成份被洗去。加入酶標(biāo)抗體，抗相關(guān)蛋白1(FGL1)抗體與結(jié)合在單抗上的相關(guān)蛋白1(FGL1)結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物，若反應(yīng)孔中有纖維蛋白原相關(guān)蛋白1(FGL1)，辣根過氧化物酶會(huì)使無色的顯色劑現(xiàn)藍(lán)色，加終止液變黃。在450nm處測OD值，纖維蛋白原相關(guān)蛋白1(FGL1)濃度與OD450值之間呈正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中的纖維蛋白原相關(guān)蛋白1(FGL1)濃度。

相關(guān)蛋白1(FGL1)檢測試劑盒樣品收集:

1. 血清：全血樣品于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。

2. 血漿：抗凝劑使用EDTA-Na2，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測。避免使用溶血，高血脂樣品。

3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)

影響測量結(jié)果），稱重后將碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測。

5. 其它生物樣品：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測

6. 樣品應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。

7. 樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃，若不能及時(shí)檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測)，或-80℃（6個(gè)月內(nèi)檢測），避免反復(fù)凍融。

8. 如果您的樣品中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品zui高值，請根據(jù)實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋（建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù)）。

試驗(yàn)所需自備物品:

1. 酶標(biāo)儀(450nm波長濾光片)

2. 高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL

3. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水

4. 吸水紙