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ELSIA試劑盒組織勻漿液步驟

點(diǎn)擊次數(shù):1304 更新時(shí)間:2022-07-20

  測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELSIA試劑盒,標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,曲線高點(diǎn)的吸光度可接近2.0,繪制時(shí)常用半對數(shù)紙,以檢測物的濃度為橫坐標(biāo),以吸光度為縱坐標(biāo),將各濃度的值逐點(diǎn)連接,所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨于平坦,中間較呈直線的部分是的檢測區(qū)域。影響反應(yīng)因素較多,特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的一致,因此在定量測定中,每批測試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
 
  組織勻漿液
 
  (1) 將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗,洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
 
  (2)將組織塊稱重,記錄后剪碎,碎塊應(yīng)盡量小,便于勻漿得更充分。
 
  (3)將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿,勻漿時(shí)置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量:PBS體積=1:9的比例勻漿,例如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,檢測后計(jì)算樣品濃度時(shí)應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù))。
 
  (4) 吸取勻漿液到離心管,4℃5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
 
  尿液、唾液等其他液體生物樣本1000×g離心20min,取上清即可檢測。總的來說,因?yàn)镋LSIA試劑盒只能檢測可溶性蛋白的含量,所以應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體,沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除。為了保證檢測的準(zhǔn)確性,保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個(gè)月內(nèi)檢測;4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測。
 
  另外,還應(yīng)保證樣本不含NaN3,因?yàn)镹aN3會抑制HRP的活性,從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。
 
  加標(biāo)本一般用微量加樣器,按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣(一般不建議使用)。有些指標(biāo)檢測(如間接法ELSIA試劑盒)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標(biāo)本,然后在微型震蕩器上震蕩1min。加酶結(jié)合物工作液和底物工作液時(shí)可用多道移液器,使加液過程在短時(shí)間內(nèi)完成。
 
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